BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell 大腸桿菌化學感受態細胞

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產品組分：

菌株描述

BL21-CodonPlus菌株來源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特別適合在大腸桿菌內高水平表達異源蛋白。由于異源蛋白來源宿主大量存在的某些tRNA在大腸桿菌內很是稀少，因此，想在大腸桿菌內有效表達異源蛋白通常受到限制。外力驅動下的高水平表達異源蛋白會耗盡已有的稀有tRNA，導致翻譯中止。BL21-CodonPlus菌株正是根據此缺陷而基因改造后的菌株，額外添加在大腸桿菌內最常見限制異源蛋白表達的幾種tRNA的基因拷貝。這些tRNA的存在使得許多原來在傳統BL21菌株內表達很弱的異源蛋白能夠在BL21-CodonPlus菌株內大量表達。BL21-CodonPlus-RIPL補充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子（AGA, AUA, CCC, CUA）對應的tRNA（argU, ileY, proL, leuW），顯著提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-基因的異源蛋白在大腸桿菌內的表達。

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株染色體還整合了λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因），可用于pET系列、pGEX、pMAL等載體的蛋白表達，同時具有四環素，氯mei素，鏈mei素和壯觀mei素抗性。

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株基因型：F–ompT hsdS(rB–mB–)dcm+ TetRgal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]

產品描述

本品是大腸桿菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱激轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1）   感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2）   最好在冰上融化感受態細胞。

3）   進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4）   為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

5）   產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1）  從-80℃冰箱取出取感受態細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA，用手輕彈管底輕輕混勻，冰浴靜置25min。

2）   42℃熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。

3）   向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4）   低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含氯mei素（34μg/ml）以及所選質粒篩選抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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